快捷

2.2 萃取剂及其用量的连续流动选择

2.2.1 萃取剂

对于油脂含量较低的样品，可直接经0.45μm的分析法测水系过滤膜过滤测定，但杏仁中油脂含量高达50.33%，定杏易造成滤膜堵塞，仁中不宜过滤。氰化在了解杏仁中脂肪及蛋白质的连续流动含量及特性后，选择易过滤样品，分析法测经正己烷处理后测定，定杏结果数据见表1。仁中由表1可知，氰化样品加标回收率为98.0%～104.7%，连续流动符合测定要求，分析法测正己烷对于测定结果并未产生偏差影响，定杏因此选用正己烷为萃取剂。仁中

2.2.2 正己烷用量

分别采用5、氰化10、20mL正己烷完成萃取过程，所得试验结果见表2。由表2可知，样品加标回收率为98.3%～97.3%，符合测定要求。经t检验，在此样本量下，分别加入5、10、20mL正己烷后，结果差异均无统计学意义（P＞0.05），但在实际操作中，为保证油脂量高样品的萃取效率，推荐加入10mL正己烷进行萃取。

2.3 样品放置时间及温度选择

参照食品风险监测中气相色谱法的前处理条件，为了使样品能够水解地更加充分，将样品于25～40℃条件下放置48h密封水解，样品充分水解后，放至冰箱冷藏2h再离心，可使样品更好地脂水分离，且提高了正己烷的萃取效果，因此样品水解温度为25～40℃，放置时间为48h。

2.4 线性方程与检出限

2.4.1 线性方程

在1.5仪器工作条件下测定氰化物系列标准工作溶液，以氰化物质量浓度（x）为横坐标，吸光度（y）为纵坐标绘制标准工作曲线，若取0～2.00mg/L浓度区间，线性方程为y=0.00064x+0.00236，相关系数（r）为0.9994；若取0～1.00mg/L浓度区间，线性方程为y=0.00066x–0.00055，相关系数（r）为0.9999。比较发现，浓度过高易造成峰与峰之间的距离过小，峰面积叠加掩盖，导致曲线r值降低，因此连续流动分析法测定氰化物标准工作曲线的线性范围为0～1.0mg/L，超出范围的样品需稀释后进行测定。

2.4.2 检出限

采用连续流动分析法测定空白样品11次，若杏仁取样为1.000g，定容100mL时，用2.764倍标准差计算检出限，检出限为0.05mg/kg，定量限为0.15mg/kg。

2.5 回收率与精密度

在已知含量的样品溶液中加入1.4中低、中、高浓度的加标样品溶液，在1.5仪器工作条件下重复测定6次，试验结果见表3。由表3可知，平均回收率为98.0%～104.7%，测定结果的相对标准偏差为0.56%～1.34%，表明该方法具有较高的准确度和精密度，满足检测要求。

2.6比对试验

连续流动分析方法与气相色谱法从以下几个方面进行比对：

（1）开机稳定时间、样品用量及稳定性。连续流动分析仪开机到稳定耗时较短，从进样蒸馏到测定仅需约0.5h，全程密闭蒸馏加试剂，连续进样后，每个样品分析时间约为2min，每次进样为2mL，在分析过程中序列可以连续加入后续样品。气相色谱仪稳定耗时较连续流动分析仪长，每个样品分析时间约为10min，每次进样为10mL，且在现阶段技术条件下，样品序列编辑运行后不能随时加入后续样品，需重新编辑序列及测定标准。样品量少时，二者耗时区别不大，随着样品量增加，连续流动法测定耗时明显较气相色谱法短。连续流动法在样品提取后加入了氢氧化钠以保留氰基，使样品中被测物质在水中稳定性增加，因此从耗时耗量及样品稳定性上看，连续流动法优于气相色谱法。

（2）线性范围。连续流动法测定过程中氰化物浓度过高易造成峰过大，峰间距过小，峰面积叠加掩盖，从而导致测定值准确度低，因此连续流动分析法测定氰化物的质量浓度应在0～1.0mg/L范围内，超出线性范围的样品需稀释后测定。气相色谱法的线性范围超过1.0mg/L后，相关系数降低，在0～1.0mg/L质量浓度范围内，连续流动法的r值为0.9999，优于气相色谱法r值（0.9986），因此在此浓度范围内连续流动法优于气相色谱法。

（3）检出限。气相色谱ECD检测器对氰基响应灵敏度高，检出限较连续流动法低。虽气相色谱法检出限优于连续流动法，但两法检出限均能满足检测要求。

（4）回收率。两种方法的回收率均能满足检测要求，但气相色谱法回收率跨度远大于连续流动分析法，且方法的不可控因素更多(如氯胺T)，因此，在0～1.0mg/L质量浓度范围内连续流动法回收率要优于气相色谱法。

（5）精密度。在0～1.0mg/L浓度范围内，对两种方法的检测结果进行用F检验，低、中、高浓度组的F值均大于F值表中F(5，5)=5.05，即连续流动分析法的精密度优于气相色谱法。

连续流动分析法与气相色谱法比对结果如表4所示。

3 结语

建立了连续流动分析法测定杏仁中的氰化物。样品超声过程应密封且时间不能连续过长，以防止样品过热造成喷溅；样品水解后离心冷藏（4～8℃）时间应在30min以上，利于油脂分离；样品经正己烷萃取，并在滤液中加入氢氧化钠，以增加氰化物在水溶液中的稳定性；试剂在测定过程中均在较密闭空间内。连续流动分析的精密度、加标回收率等较气相色谱法的误差小，虽检出限较气相色谱法略高，但在实际工作中能满足检测要求，因此连续流动仪测定杏仁中氰化物的方法整体优于气相色谱法，其在线分析时间更短，稳定性及安全性更好，适于推广应用。

相关链接：正己烷，氢氧化钠，氰化物

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